Kỹ thuật kháng sinh đồ hay được áp dụng nhất trong các phòng xét nghiệm vi khuẩn của các bệnh viện là kỹ thuật kháng sinh khuyếch tán trong môi trường đặc (thạch). Phương pháp bán định lượng có những điểm yếu nên kết quả dễ bị thay đổi khi những điều kiện thí nghiệm thay đổi. Chính vì vậy, khi làm thí nghiệm, cần quan tâm tới môi trường nuôi cấy bao gồm: Thành phần môi trường, độ pH, độ dày của thạch và việc làm khô thạch. Việc cấy vi khuẩn theo lượng thích hợp. Việc đặt khoanh giấy thấm kháng sinh cũng cần đúng kỹ thuật. Ủ ấm nên ủ qua đêm (16-20 giờ) ở nhiệt độ 35-37oC. Đánh giá kết quả: Đo chính xác đường kính vòng vô khuẩn và phải chú ý tới ranh giới đặc biệt của vòng vô khuẩn ở mỗi loại kháng sinh. Giá trị ranh giới để xếp loại độ nhạy cảm thành đề kháng "B", "nhạy cảm vừa M" và nhạy cảm "S" được thể hiện theo bảng 3.