Thiết kế vector biểu hiện vùng kháng nguyên 3 (E3) thuộc gen mã hoá protein vỏ của virut dengue typ 2 trong escherichia coli
Tóm tắt
Tiến hành khuếch đại đoạn gen E3 thuộc gen mã hóa protein vỏ của virut dengue typ 2 bằng kỹ thuật PCR với cặp mồi biểu hiện được thiết kế có treo vị trí cắt của enzym giới hạn BamHI và XhoI. Gen mã hóa kháng nguyên vỏ và kháng nguyên màng ( preM-E) của virut dengue typ 2 đã tạo dòng và xác định trình tự trước đây được sử dụng làm khuôn để khuếch đại đoạn gen E3. Đoạn gen E3 sau khi đã được tạo dòng trong vector Topo - TA, được cắt và gắn vào vector biểu hiện pET-TRX-FuS ( pET-TRX Fusion Expression Vector System) bằng hai vị trí của enzym giới hạn BamHI và XhoI. Vector pET-TRX-FuS-D2E3 tái tổ hợp được biến nạp vào tế bào E.coli chủng biểu hiện BL21 DE3 Star. Sau khi cảm ứng bằng IPTG với nồng độ 1mM trong thời gian 3 giờ ở 37 độ C, protein tái tổ hợp D2E3 được tạo ra dưới dạng fusion protein bao gồm Thioredoxin - D2E3-HisTag và có trọng lượng phân tử khoảng 30 kDa. Protein tái tổ hợp được tinh sạch qua cột ái lực ProBond Nickel - Chelating Resin ( Invitrogen) và được kiểm khả năng phản ứng với kháng thể kháng virut dengue tự nhiên trong huyết thanh bệnh nhân bằng kỹ thuật Western blot, Dot blot và Elisa. Kết quả cho thấy, protein tái tổ hợp D2E3 có phản ứng đặc hiệu với kháng thể kháng virut dengue tự nhiên.

Vị trí tài liệu

Trung tâm Tích hợp dữ liệu

CỤC CÔNG NGHỆ THÔNG TIN, BỘ Y TẾ

Ngõ 135 Núi Trúc, Ba Ðình, Hà Nội

Điện thoại: 04.3736.8315 (máy lẻ 12); Fax: 04.3736.8319

Email: hungnb.cntt@moh.gov.vn     Website: yte.gov.vn