Có 4 nguyên tắc xác định liều ED50: Xác định ED50 là liều có hiệu quả ở 50% số con vật thực nghiệm; Các con vật được chia thành nhiều lô tương tự nhau; Mỗi lô dùng một liều tính theo kg thể trọng, các lô khác nhau dùng liều khác nhau chất định nghiên cứu; Đánh giá theo nguyên tắc "có hoặc không" ở mỗi lô. Ví dụ 1: xác định ED50 về tác dụng chống loạn nhịp tim của propranolol tiêm tĩnh mạch trên mô hình gây loạn nhịp tim bằng BaCl2 ở thỏ: kết quả liều có hiệu quả chống loạn nhịp tim 50% của propranolon là ED50 = 1,97mg/kg. Ví dụ 2: xác định ED50 tác dụng hạ glucose huyết của glibenclamid trên mô hình gây tăng glucose huyết bằng alloxan ở chuột cống trắng: kết quả liều có hiệu quả hạ glucose huyết 50% của glibenclamid là ED50 = 6,02mg/kg.